Obsah:

Ako vyberáte klony?
Ako vyberáte klony?

Video: Ako vyberáte klony?

Video: Ako vyberáte klony?
Video: 💩 КЛЕШ РОЯЛЬ НА МИНИМАЛКАХ! КЛОНЫ КЛЕШ РОЯЛЯ / War Alliance: Heroes 2024, November
Anonim

Kedy výberom a klonovať , uistite sa, že korene sú silné, biele a dychtivo vyčnievajúce z rastového média. Ak sú korene hnedé a scvrknuté, alebo sa zdajú byť inak neaktívne, vráťte ho späť a hľadajte lepší.

Okrem toho, ako naklonujete jednu bunku?

  1. Spočítajte bunky, aby ste vložili ~16 000 buniek do prvej jamky (A1) 96-jamkovej platne obsahujúcej 200 ul média.
  2. Odstráňte 100 µl z buniek obsahujúcich A1 a zmiešajte s B1, pipetovaním hore a dole 3x dobre premiešajte pred odstránením 100 µl a zmiešaním s C1 atď.

Tiež, ako si vybrať kolóniu buniek cicavcov? Umiestnite platňu pod mikroskop, aby ste vybrali nediferencované zdravé kolónie . Vyberte kolónie pomocou pipety P-20 nastavenej na 10 ul. Opatrne vyzdvihnúť a kolónie bez rozbitia kolónie do slobodného bunky a preneste ju do 96-jamkovej platne s trypsínom. Pipetujte niekoľkokrát hore a dole, aby sa rozptýlila kolónie.

Ako teda používate klonovací valec?

Použitím sterilné stredné kliešte, vyberte a klonovací valec . Jemne zatlačte na ploché dno valec do hladkého silikónového tuku a náhlym vertikálnym pohybom odstráňte. Ak sa to urobí správne, dosiahne to rovnomerné rozloženie mastnoty na spodnej časti valec . Nastaviť valec nad kolóniou.

Ako si vyberáte kolónie pre stabilné bunkové línie?

Protokol na generovanie stabilných bunkových línií vyžaduje niekoľko krokov, ako je uvedené nižšie:

  1. Vytvorte krivku zabíjania na určenie optimálnej koncentrácie selekčného antibiotika.
  2. Transfekcia buniek požadovaným plazmidovým konštruktom (konštruktmi)
  3. Vyberte a rozšírte stabilné polyklonálne kolónie.
  4. Identifikujte jednotlivé klony obmedzeným riedením a expanziou.

Odporúča: