Čo sa stane, ak pridáte príliš veľa reštrikčného enzýmu?
Čo sa stane, ak pridáte príliš veľa reštrikčného enzýmu?

Video: Čo sa stane, ak pridáte príliš veľa reštrikčného enzýmu?

Video: Čo sa stane, ak pridáte príliš veľa reštrikčného enzýmu?
Video: Java Tech Talk: Telegram бот на java за 1 час 2024, November
Anonim

Môže sa vyskytnúť neúplné trávenie keď priveľa alebo tiež málo enzým sa používa. The prítomnosť kontaminantov v na vzorka DNA môcť inhibovať enzýmy čo tiež vedie k neúplnému tráveniu. Niektorí reštrikčné enzýmy vyžadujú kofaktory pre plnú aktivitu.

Okrem toho, prečo sa reštrikčné enzýmy pridávajú ako posledné?

The reštrikčný enzým je zvyčajne posledný komponent pridané na reakciu, aby sa zabezpečilo, že nebude vystavený extrémnym podmienkam. Zostavená reakcia by sa mala potom premiešať enzým prídavok. Zmiešajte všetky roztoky obsahujúce reštrikčné enzýmy jemne vyhnúť enzým inaktivácia.

Okrem toho, ako možno zlepšiť trávenie reštrikčnými enzýmami? Nepoužívajte viac, ako je odporúčané enzým množstvo (napr. 10 jednotiek enzým na mikrogram DNA). Znížte množstvo enzým v reakcii, ak je to potrebné. Vyhnite sa dlhšej inkubácii trávenie reakciu. Použite odporúčaný reakčný pufor.

Tiež viete, prečo by sa reštrikčný enzým neredukoval?

Príprava DNA na štiepenie by mal byť bez kontaminantov, ako je fenol, chloroform, alkohol, EDTA, detergenty alebo nadmerné soli, ktoré môžu interferovať s reštrikčný enzým činnosť. Ak je prítomný inhibítor (často soľ, EDTA alebo fenol), kontrolná DNA bude nestrihať po zmiešaní.

Prečo môže množstvo enzýmu spôsobiť aktivitu hviezd?

Aktivita hviezd je uvoľnenie alebo zmena špecifickosti obmedzenia enzým sprostredkované štiepenie DNA, ktoré môcť sa vyskytujú za reakčných podmienok, ktoré sa výrazne líšia od podmienok optimálnych pre enzým . Aktivita hviezd môže dochádza v dôsledku prítomnosti Mg2+, as je vidieť napríklad v HindIII.

Odporúča: