Aký je účel používania ddNTP?
Aký je účel používania ddNTP?

Video: Aký je účel používania ddNTP?

Video: Aký je účel používania ddNTP?
Video: B1T5 - севенирование ДНК по Сэнгеру 2024, November
Anonim

DdNTP odkazuje na dideoxynukleotidy trifosfáty, ktoré sa používajú v Sangerovej dideoxy metóde na výrobu rôznych dĺžok reťazcov DNA na sekvenovanie DNA. To má za následok ukončenie procesu polymerizácie DNA (alebo predlžovania DNA), pretože tento proces potrebuje na pokračovanie 3'-OH skupinu.

Prečo sa teda ddNTP používajú pri sekvenovaní?

dideoxynukleotidy sú inhibítory DNA polymerázy predlžujúce reťazec, použité v Sangerovej metóde pre DNA sekvenovanie . Dideoxyribonukleotidy nemajú 3' hydroxylovú skupinu, a preto nemôže dôjsť k ďalšiemu predlžovaniu reťazca, keď je tento dideoxynukleotid na reťazci. To môže viesť k ukončeniu DNA sekvencie.

Podobne sa ddNTP pripájajú k dNTP? Jeden alebo viac z dNTP sú rádioaktívne označené, aby pomohli vizualizovať replikačné produkty. Nakoniec každá skúmavka dostane jeden zo štyroch špeciálnych nukleotidov, tzv dideoxynukleotidy ( ddNTP ). Po začlenení však DNA polymeráza nemôže ďalej predlžovať reťazec, pretože potrebuje 3'-OH to priložiť na ďalší nukleotid.

Podobne sa možno pýtať, ako ddNTP zastavia sekvenčnú reakciu?

Keď sú prítomné v malých množstvách v sekvenčné reakcie dideoxyribonukleozidtrifosfáty ( ddNTP ) ukončiť sekvenčná reakcia v rôznych pozíciách rastúcich reťazcov DNA. ddNTP zastavujú sekvenčnú reakciu pretože: spôsobujú, že DNA polymeráza odpadáva z templátového vlákna. c.

Aká technika zahŕňajúca dideoxynukleotidy by sa mohla použiť?

Sangerove sekvenovanie je a metóda DNA sekvenovania založeného na selektívnom začlenení zakončenia reťazca dideoxynukleotidy DNA polymerázou počas in vitro replikácie DNA. Vyvinutý Frederickom Sangerom a kolegami v roku 1977 bol najrozšírenejší použité sekvenovanie metóda približne 40 rokov.

Odporúča: