Prečo sa glukóza používa na izoláciu plazmidovej DNA?
Prečo sa glukóza používa na izoláciu plazmidovej DNA?

Video: Prečo sa glukóza používa na izoláciu plazmidovej DNA?

Video: Prečo sa glukóza používa na izoláciu plazmidovej DNA?
Video: Перец от семени до плода 2024, November
Anonim

Účelom tohto kroku je zvýšiť počiatočný objem buniek tak, aby viac plazmidovej DNA možno izolovať na prep. Glukóza sa pridáva na zvýšenie osmotického tlaku mimo buniek. Tris je pufrovacie činidlo použité na udržanie konštantného pH (= 8,0).

Podobne, aká je úloha glukózy pri extrakcii DNA?

50 mM (milimolárny) glukózový cukor sa pridáva do GTE pufra na udržanie osmolarity, kde je koncentrácia rozpustenej látky mimo buniek blízka koncentrácii vo vnútri buniek. To zabraňuje predčasnej lýze buniek, ktorá môže spôsobiť nižšie DNA výnosy v dôsledku agregácie a degradácie.

Ďalej, prečo sa NaOH používa pri extrakcii DNA? In izolácia DNA alebo ťažba , NaOH ( Hydroxid sodný ) je použité ako alkalický lýzny pufor. V podstate pomáha pri rozpúšťaní bunkovej membrány, takže vnútorné zložky bunky vrátane DNA vyjsť.

Aký je teda účel izolácie plazmidovej DNA?

Izolácia plazmidu . The izolácia z plazmidovej DNA z baktérií je kľúčovou technikou v molekulárnej biológii a je základným krokom v mnohých postupoch, ako je klonovanie, DNA sekvenovanie, transfekcia a génová terapia. Tieto manipulácie vyžadujú izolácia vysokej čistoty plazmidovej DNA.

Ako izolujete plazmidovú DNA z E coli?

The izolácia z plazmidová DNA z E . coli použitie alkalickej lýzy je dobre zavedenou metódou. E . coli s plazmid sa kultivuje v médiu s antibiotikami do vysokej hustoty buniek, zozbiera sa a potom sa lýzuje roztokom SDS/NaOH.

Odporúča: